Caracterización del factor de splicing cwf15 y su relación con el procesamiento del ARNm y la inestabilidad genómica

Resumen

Introducción: Los daños en el ADN que no se reparan llevan a la senescencia celular, la apoptosis y a la generación de tumores. Los R-loop son híbridos que de ADN:ARN que se forman cuando se producen problemas con la transcripción o la replicación del material genético. Estos R-loops conducen inevitablemente a la formación roturas de doble cadena (DBS) y, por ende, a la inestabilidad genómica. En los últimos años, se han identificado numerosos factores de procesamiento de ARN conservados evolutivamente que previenen la inestabilidad genómica mediada por la formación de R-loop (Li y Manley, 2005; Santos-Pereira et al., 2014). En este proyecto fin de máster se caracteriza, utilizando la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe, un mutante en un factor asociado al spliceosoma, cwf15, que produce inestabilidad genómica asociada al metabolismo del ARNm.

Métodos: Para el estudio de la función del gen cwf15 se aplicaron técnicas celulares, moleculares y de microscopia confocal en células vivas a tiempo real y análisis genéticos para la caracterización del fenotipo mutante, así como aproximaciones trascriptómicas para determinar qué aspectos del procesamiento de ARN están afectados.

Resultados y conclusiones: Diversas interacciones genéticas negativas con factores de procesamiento de ARNm confirman que la proteína cwf15 está implicada en splicing. Sin embargo, sorprendentemente, la pérdida de función del gen provoca la incapacidad de elongación del huso, un defecto específico en la segregación del material genético esencial para el mantenimiento de la integridad genómica. La formación de numerosos acúmulos del marcador rad22 en el núcleo pueden apuntar a problemas de hiperrecominación causados por un aumento de los daños en el ADN. Este aumento se reduce drásticamente por la sobrexpresión de la RNAsaH, lo que lleva a pensar que la causa molecular de la inestabilidad genómica es la formación masiva de R-loops. Por otro lado, los datos de RNA-seq parecen indicar que existen defectos en la terminación de la transcripción, sugiriendo una novedosa conexión entre la maquinaria de splicing, o algunos de sus factores, y el procesamiento del extremo 3´del mRNA.