Papel del Factor de Transcripción EB (TFEB) en la entrada de Acinetobacter baumannii en el huésped

Resumen

Motivación:El sistema endosoma/lisosoma está implicado en procesos fundamentales tales como la secreción, reparación de la membrana plasmática, señalización y en el metabolismo energético(1).El factor de transcripción EB (TFEB) forma parte de este sistema (2) y podría estar implicado en la entrada y la persistencia de Acinetobacter baumannii en el huésped mediante la activación del mismo. A.baumannii es un agente infeccioso de gran importancia clínica que está asociado con las infecciones nosocomiales (3). Hasta el momento no hay trabajos realizados para observar dicho proceso. El objetivo de este estudio es determinar el papel del TFEB en la entrada y la persistencia de A.baumannii en el huésped mediante el silenciamiento del ARN del TFEB y su sobreexpresión in vitro.

Métodos: Se utilizaron células epiteliales de pulmón humano (A549) que fueron infectadas con la cepa A.baumannii (ATCC 17978 con 10⁸ ufc/ml) para observar los diferentes objetivos del proyecto. Para todos los ensayos en primer lugar se cultivaron las células A549 en placas con medio de cultivo completo durante 24 h para realizar ensayos de silenciamiento, expresión y sobreexpresión del TFEB. Para efectuar el silenciamiento del ARN del TFEB o su sobreexpresión se realizó una transfección con el siRNA del TFEB o con un plásmido pEGFP-N1-TFEB durante 48 o 24 h, respectivamente, y luego realizamos ensayos de adherencia e invasión bacteriana en las células A549 durante 2 h. La expresión del TFEB se determinó por Westerm Blot. También se llevó a cabo ensayos de inmunomarcaje con diferentes anticuerpos para observar las diferencias de expresión del TFEB entre células infectadas y no infectadas durante 30 y 120 min.

Resultados: Se observó que el silenciamiento del ARN del TFEB disminuye la entrada bacteriana en las células epiteliales (64% vs. control). Todo lo contrario en el caso de la sobreexpresión del TFEB que vimos que hay una mayor invasión bacteriana (266% vs. control). Referente a los ensayos de expresión del TFEB vemos un aumento progresivo de la expresión del TFEB tras 30 y 120 min de la infección con respecto a las células que no han sido infectadas.

Conclusiones: Los resultados obtenidos en este estudio permiten concluir que el TFEB está implicado en la entrada de A.baumannii en el huésped. Esto puede abrir nuevos caminos para encontrar inhibidores de estas vías y así poder evitar las infecciones causadas por este tipo de bacterias, puesto que hoy en día es un patógeno resistente.