Diseño de un kit para dar valor agregado a un anticuerpo monoclonal que reconoce a la catalasa

Resumen

La catalasa, es una enzima cuya función es catalizar la conversión del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular a través de su actividad peroxidasa, de esta forma protege a las células del estrés oxidativo provocado por las especies reactivas del oxígeno (ROS). En el hombre se encuentra en forma tetramérica, compuesta por 4 subunidades idénticas de 60KD. Estas ROS son responsables del daño celular generado en una gran variedad de enfermedades humanas, como las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la hipertensión arterial, el vitíligo, el cáncer, las enfermedades neurodegenerativas como el Parkinson o el Alzheimer y el envejecimiento. Hay estudios en pacientes, que ponen de manifiesto el incremento de actividad de la catalasa en estas patologías que van acompañadas de un incremento del estrés oxidativo. En nuestro laboratorio hemos producido un anticuerpo monoclonal que reconoce un epítopo de la forma humana de esta enzima. Éste se generó utilizando como inmunógeno células embrionarias humanas HS181. Dicho anticuerpo fue seleccionado por reacción positiva en ELISA indirecto frente a células embrionarias humanas HS181 y fibroblastos. Se determinó su isotipo, es IgM. Para confirmar que efectivamente nuestro anticuerpo reconoce a la catalasa, se inmunoprecipitó el ligando y se dilucido su identidad mediante métodos proteómicos utilizando Maldi-Tof. Adicionalmente se caracterizó la eficiacia del anticuerpo para ser utilizado por diferentes técnicas como citometría de flujo, inmunohistoquímica y Wester Blot, frente a distintas líneas celulares, como las HS181, Fibroblastos, D3, INS, MSHU, entre otras. El objetivo de este proyecto a partir de aquí, es diseñar un kit de ELISA para ser utilizado en el diagnóstico clínico de aquellas enfermedades que van acompañadas de un aumento del nivel de catalasa en sangre.

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