Elaboración de un kit de separación magnética de células CD3+

Resumen

Las técnicas de separación magnética son cada vez más importantes, con un amplio rango de aplicaciones en el campo de la biomedicina. La propiedad más notable y atractiva de los materiales magnéticos es que pueden ser aislados de una solución al aplicar un campo magnético externo.

El principal objetivo de este proyecto es desarrollar un kit de separación celular utilizando nanopartículas magnéticas (NPm) de Gennova, conjugadas con el anticuerpo anti-CD3 (marcador específico de linfocitos T). Este proceso se realizará mediante la metodología AUTOMACS de Miltenyi. Tomando como referencia los resultados obtenidos por este método, intentaremos mejorarlo utilizando las NPm de Gennova.

La primera tarea realizada en este proyecto es la activación de las NP. Partimos de NPm de 100nm, cubiertas por una matriz de polímeros con grupos terminales hidroxilos. Estas NPm deben ser funcionales y para ello son activadas con un novedoso reactivo de Gennova, denominado Smart-Link. Una vez activadas, pueden ser conjugadas con anticuerpos (en nuestro caso anti-CD3). Se utiliza un protocolo de acoplamiento que permite que el anticuerpo se una al reactivo Smart-Link por la región Fb, para que así la región Fab pueda reconocer el marcador celular de interés. A partir de este momento el complejo estará listo para su aplicación.

La suspensión celular se obtiene de una cantidad de sangre concentrada (Buffy Coat). Realizaremos una separación en gradiente de densidad utilizando Ficoll para extraer las células mononucleares (nos interesan los linfocitos T).

Los linfocitos T expresan en su superficie CD3. Al incubar las células con las NPm conjugadas con anticuerpos, se producirá la unión de ambas, ya que el anticuerpo reconocería al marcador de superficie celular. La separación magnética se realiza utilizando un equipo denominado AUTOMACS. Este dispositivo recoge toda la suspensión celular y separa las células en una fracción positiva (linfocitos T) y una fracción negativa (resto de células), usando un campo magnético. Nos quedaremos con la fracción positiva y realizaremos un recuento celular en la cámara de Neubauer para conocer la cantidad de células separadas.

A día de hoy aún no se han obtenido resultados concluyentes pero en un futuro próximo se espera conseguir una separación eficiente de linfocitos T con el uso de las NPm de Gennova y así poder desarrollar el Kit de separación celular correspondiente.